Plasmide Double Nickase (h) FGF-8: sc-403127-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) FGF-8 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide FGF-8 Double Nickase (h) et le plasmide FGF-8 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant FGF8. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: FGF-8 Antibody (2A10): sc-293479
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) FGF-8 | sc-403127-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) FGF-8 | sc-403127-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FGF8 code le facteur de croissance des fibroblastes 8 (FGF-8), un ligand de signalisation sécrété qui se lie aux récepteurs FGFR pour activer les voies MAPK/ERK, PI3K–AKT et PLCγ, lesquelles coordonnent la prolifération, la survie et la migration cellulaires, ainsi que la spécification des lignages. Il s’agit d’un morphogène clé lors de la mise en place des structures embryonnaires, notamment au cours du développement du mésencéphale et du rhombencéphale, de la morphogenèse craniofaciale et de la croissance des bourgeons des membres ; il contribue également à l’homéostasie tissulaire via une signalisation paracrine. Une expression dérégulée de FGF8 ou une hyperactivation de la voie des FGFR a été associée à des programmes de développement altérés et à des réseaux de signalisation oncogéniques dans de multiples contextes tumoraux. Comme FGF-8 s’inscrit à l’interface de la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase et des programmes transcriptionnels en aval, il est fréquemment étudié dans des modèles de différenciation, de dynamiques épithélio-mésenchymateuses et de signaux de croissance dictés par le microenvironnement.
FGF-8 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FGF8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FGF8. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FGF8. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FGF8.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.