FGF-8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403127

Panoramica

FGF8 codifica il fattore di crescita dei fibroblasti 8 (FGF-8), un ligando di segnalazione secreto che si lega ai recettori della famiglia FGFR per regolare la definizione dei pattern embrionali, la morfogenesi dei tessuti e le decisioni sul destino cellulare. FGF-8 attiva le vie canoniche dei recettori tirosin-chinasici (RTK), tra cui RAS–MAPK/ERK, PI3K–AKT e la segnalazione mediata da PLCγ, influenzando in modo dipendente dal contesto programmi di proliferazione, migrazione e differenziamento. Una disregolazione dell’espressione di FGF8 e dell’attività della via FGFR è stata collegata ad anomalie dello sviluppo e a reti di segnalazione oncogeniche in molteplici tipi tumorali, in cui alterazioni della segnalazione dei fattori di crescita possono rimodellare i programmi di linea cellulare e le interazioni con il microambiente. In ambito di ricerca, FGF8 è comunemente studiato per i suoi ruoli nella biologia dello sviluppo, nei programmi trascrizionali dipendenti dai fattori di crescita e nel crosstalk tra vie di segnalazione che controlla l’omeostasi tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene FGF8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del FGF8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto FGF8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FGF-8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di FGF8 per lo studio della segnalazione di FGF-8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni FGF8 critici per la funzione di FGF-8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di FGF8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FGF-8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal FGF-8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus FGF8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FGF-8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR FGF-8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia FGF8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio FGF8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.