Plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-8 (h): sc-403127

Présentation

FGF8 code le facteur de croissance des fibroblastes 8 (FGF-8), un ligand de signalisation sécrété qui se lie aux récepteurs de la famille FGFR afin de réguler la mise en place des plans embryonnaires, la morphogenèse des tissus et les décisions de destinée cellulaire. FGF-8 active des voies canoniques de type RTK, notamment RAS–MAPK/ERK, PI3K–AKT et la signalisation PLCγ, influençant de façon dépendante du contexte les programmes de prolifération, de migration et de différenciation. Une dérégulation de l’expression de FGF8 et de l’activité des voies FGFR a été associée à des anomalies du développement ainsi qu’à des réseaux de signalisation oncogéniques dans de nombreux types de tumeurs, où une signalisation des facteurs de croissance altérée peut remodeler les programmes de lignée et les interactions avec le microenvironnement. En recherche, FGF8 est couramment étudié pour ses rôles en biologie du développement, dans les programmes transcriptionnels dépendants des facteurs de croissance et dans les interactions entre voies de signalisation qui contrôlent l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO FGF-8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène FGF8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du FGF8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert FGF8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine FGF-8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en FGF8 pour l'étude de la signalisation de FGF-8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de FGF8 essentiels à la fonction de FGF-8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de FGF8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le FGF-8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le FGF-8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus FGF8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le FGF-8 plasmide HDR (h) et le FGF-8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie FGF8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles FGF8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.