FGF-21 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401193-ACT

L’FGF21 umano codifica il fibroblast growth factor 21 (FGF-21), un membro della famiglia FGF con caratteristiche simili a un ormone, che regola l’equilibrio energetico sistemico e le risposte allo stress nutrizionale. La segnalazione di FGF-21 integra i programmi metabolici di epatociti, adipociti e muscolo, influenzando l’omeostasi di glucosio e lipidi tramite vie mediate da FGFR che richiedono il co-recettore β-Klotho, con modulazione a valle di MAPK/ERK e delle relative reti trascrizionali. È fortemente indotto dal digiuno, dagli stati chetogenici e dallo stress cellulare, coordinando risposte adattative quali ossidazione degli acidi grassi, chetogenesi e sensibilità all’insulina. Un’espressione disregolata di FGF21 è stata associata a disturbi metabolici tra cui obesità, diabete di tipo 2, steatosi epatica non alcolica e fenotipi più ampi di rischio cardiometabolico, rendendolo un nodo utile per l’interrogazione delle vie di segnalazione.

FGF-21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FGF21 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FGF-21 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FGF21 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FGF21, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FGF-21. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FGF21 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FGF-21 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FGF-21 nelle cellule tumorali con espressione di FGF21 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.