FGF-13 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420327-ACT

Il gene murino **Fgf13** codifica il fattore di crescita dei fibroblasti 13 (**FGF-13**), un membro intracellulare della famiglia FGF che agisce prevalentemente al di fuori della segnalazione canonica secreta FGF/FGFR. FGF-13 si associa ai microtubuli e modula la dinamica del citoscheletro, la crescita dei neuriti e la polarizzazione neuronale; inoltre è stato collegato alla regolazione dell’attività dei canali del sodio voltaggio-dipendenti, che determina l’eccitabilità nel sistema nervoso. Attraverso questi ruoli, FGF-13 si interseca con vie che governano lo sviluppo assonale, la funzione sinaptica e la maturazione neuronale dipendente dall’attività. Un’espressione o una funzione disregolata di FGF-13 è stata implicata in fenotipi neuroevolutivi e neuropsichiatrici, a supporto del suo impiego in studi sulla formazione dei circuiti e sui meccanismi di malattia legati all’eccitabilità.

FGF-13 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Fgf13 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FGF-13 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Fgf13 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Fgf13, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FGF-13. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Fgf13 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FGF-13 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FGF-13 nelle cellule tumorali con espressione di Fgf13 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.