Plasmide Double Nickase (h) fetuin-A: sc-401125-NIC

AHSG code la glycoprotéine plasmatique humaine fœtuine-A (fetuin-A), un facteur sécrété d’origine hépatocytaire qui circule en forte abondance et se lie aux complexes calcium‑phosphate afin de moduler l’homéostasie minérale extracellulaire. La fœtuine-A participe à la régulation de la calcification en formant des particules calciprotéiques et en influençant la signalisation ostéogénique, et elle peut interagir avec de multiples ligands pour affecter des voies inflammatoires et métaboliques. Dans des systèmes cellulaires, une expression modifiée d’AHSG ou une variation de la disponibilité en fœtuine-A a été associée à des changements de la signalisation de l’insuline, de la fonction adipocytaire et des états d’activation des macrophages. La dérégulation de la fœtuine-A a été étudiée dans des contextes tels que la calcification ectopique, des phénotypes associés au syndrome métabolique, l’inflammation chronique, ainsi que des processus pathobiologiques rénaux et vasculaires, ce qui étaye son utilisation comme marqueur mécanistique dans des modèles de recherche translationnelle.

fetuin-A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AHSG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AHSG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AHSG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AHSG.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.