FER1L6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405070-ACT

FER1L6 codifica um membro da família ferlin, composta por proteínas grandes com múltiplos domínios C2, implicadas na dinâmica de membranas dependente de Ca2+ e em interações proteicas dependentes de fosfolipídios. Embora o FER1L6 seja menos bem caracterizado do que outras ferlins, essa classe de proteínas está amplamente associada ao tráfego vesicular, ao reparo de membrana, à endocitose e à regulação de eventos de fusão de membranas que influenciam a sinalização celular e a remodelação do citoesqueleto. A expressão e alterações genômicas de FER1L6 foram relatadas em diversos conjuntos de dados transcriptômicos e de genômica do câncer, sugerindo uma possível relevância para processos como proliferação, migração e adaptação ao estresse em contextos celulares específicos. Essas características tornam o FER1L6 um alvo útil para estudos mecanísticos de vias associadas à membrana e de modulação fenotípica em modelos de células humanas.

FER1L6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FER1L6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FER1L6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FER1L6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FER1L6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FER1L6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FER1L6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FER1L6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FER1L6 em células tumorais com expressão de FER1L6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.