FER1L6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405070-ACT

FER1L6 codifica un membro della famiglia delle ferline, grandi proteine con domini C2 multipli implicate nella dinamica di membrana dipendente da Ca2+ e in interazioni proteina‑proteina dipendenti dai fosfolipidi. Sebbene FER1L6 sia meno caratterizzata rispetto ad altre ferline, questa classe di proteine è ampiamente associata al traffico vescicolare, alla riparazione della membrana, all’endocitosi e alla regolazione di eventi di fusione di membrana che influenzano la segnalazione cellulare e il rimodellamento del citoscheletro. L’espressione di FER1L6 e alterazioni genomiche sono state riportate in molteplici dataset di trascrittomica e di genomica dei tumori, suggerendo una potenziale rilevanza in processi quali proliferazione, migrazione e adattamento allo stress in specifici contesti cellulari. Queste caratteristiche rendono FER1L6 un bersaglio utile per studi meccanicistici sulle vie associate alla membrana e sulla modulazione del fenotipo in modelli cellulari umani.

FER1L6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di FER1L6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FER1L6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus FER1L6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione FER1L6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FER1L6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus FER1L6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FER1L6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FER1L6 nelle cellule tumorali con espressione di FER1L6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.