Fc ε RIγ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420303

Panoramica

Fcer1g codifica la catena gamma del recettore Fc (FcεRIγ), un adattatore di segnalazione contenente un motivo ITAM che si associa a molteplici immunorecettori, inclusi FcεRI e i complessi dei recettori Fcγ, collegando il legame del ligando all’attivazione a valle. In seguito al crosslinking del recettore, FcεRIγ innesca cascate di segnalazione dipendenti da SYK che intersecano PI3K, PLCγ, MAPK, il flusso di calcio, la degranulazione, la produzione di citochine e programmi fagocitici nelle cellule mieloidi e nelle popolazioni immunitarie residenti nei tessuti. Nel topo, Fcer1g sostiene il riconoscimento innato e le risposte effettrici in macrofagi, cellule dendritiche, mastociti e microglia, modulando il tono infiammatorio e la gestione degli immunocomplessi. Le vie deregolate collegate a FcεRIγ sono ampiamente studiate nell’infiammazione allergica, nella patologia autoimmune mediata da immunocomplessi e nei processi neuroinfiammatori, in cui la segnalazione dei recettori Fc influenza il danno tissutale e il rimodellamento.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Fc ε RIγ (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fcer1g in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fcer1g insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fcer1g a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Fc ε RIγ.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fcer1g per lo studio della segnalazione di Fc ε RIγ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fcer1g critici per la funzione di Fc ε RIγ
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fcer1g per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Fc ε RIγ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Fc ε RIγ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fcer1g. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Fc ε RIγ Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Fc ε RIγ (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fcer1g per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fcer1g definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.