FBXO3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425412

Panoramica

Fbxo3 codifica nel topo la proteina F-box FBXO3, una componente di riconoscimento del substrato dei complessi di ligasi E3 dell’ubiquitina SCF (SKP1–CUL1–RBX1), che contribuiscono a controllare la proteostasi attraverso il turnover proteico dipendente dall’ubiquitina. Indirizzando l’ubiquitinazione selettiva, FBXO3 influenza la dinamica della segnalazione cellulare, i programmi del ciclo cellulare e di risposta allo stress, e la stabilità dei regolatori di via. Alterazioni dell’attività nelle reti SCF–F-box sono state associate a un’infiammazione deregolata e, più in generale, a una segnalazione immunitaria alterata, nonché a cambiamenti dell’omeostasi cellulare rilevanti per la biologia delle malattie. Queste caratteristiche rendono Fbxo3 un nodo utile per studiare come la via ubiquitina–proteasoma controlli la segnalazione e il fenotipo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FBXO3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fbxo3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fbxo3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fbxo3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FBXO3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fbxo3 per lo studio della segnalazione di FBXO3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Fbxo3 critici per la funzione di FBXO3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fbxo3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FBXO3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FBXO3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fbxo3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FBXO3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FBXO3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fbxo3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fbxo3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.