FBXO3 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-425412-ACT

Il gene murino **Fbxo3** codifica **FBXO3**, un recettore di substrati F-box all’interno dei complessi ligasi E3 dell’ubiquitina **SCF** (SKP1–CUL1–F-box), che contribuisce a conferire specificità al turnover proteasomiale dipendente dall’ubiquitina. Attraverso la degradazione regolata di proteine di segnalazione, FBXO3 concorre al controllo di vie infiammatorie e di risposta allo stress, inclusi la segnalazione dell’immunità innata e la produzione di citochine. Alterazioni dell’attività di FBXO3 sono state associate a un’infiammazione disregolata e a squilibri dell’omeostasi immunitaria, rendendolo rilevante per studi sulla biologia delle infezioni, fenotipi infiammatori cronici e soglie di segnalazione specifiche per tipo cellulare. Come componente dei circuiti del sistema ubiquitina–proteasoma, **Fbxo3** è utile anche per indagare come la stabilità proteica si integri con i programmi trascrizionali e la regolazione post-traduzionale.

FBXO3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Fbxo3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FBXO3 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Fbxo3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Fbxo3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FBXO3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Fbxo3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FBXO3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FBXO3 nelle cellule tumorali con espressione di Fbxo3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.