FBPase Plasmide Double Nickase (h): sc-404693-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FBPase Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FBPase Double Nickase Plasmid (h) e il FBPase Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FBP1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: liver FBPase Antibody (B-10): sc-166298
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FBPase Plasmide Double Nickase (h) | sc-404693-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FBPase Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404693-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FBP1 codifica la fruttosio-1,6-bisfosfatasi (FBPasi), un enzima gluconeogenico che rappresenta una tappa limitante della velocità e che idrolizza il fruttosio-1,6-bisfosfato a fruttosio-6-fosfato, controbilanciando l’attività della fosfofruttochinasi nella glicolisi. Nel fegato e nel rene umani, la FBPasi contribuisce a mantenere l’omeostasi sistemica del glucosio durante il digiuno e integra il controllo ormonale e allosterico all’interno del metabolismo dei carboidrati. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di FBP1 sono state collegate a errori congeniti della gluconeogenesi e al rimodellamento metabolico osservato in diversi tumori, in cui cambiamenti del flusso gluconeogenico si intrecciano con l’equilibrio redox e le esigenze biosintetiche. Poiché FBP1 si colloca in un punto di diramazione chiave del flusso del carbonio, viene spesso studiato in vie che connettono metabolismo energetico, percezione dei nutrienti e regolazione trascrizionale.
FBPase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FBP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FBP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FBP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FBP1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.