FBP2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404139-ACT

KHSRP codifica la proteina regolatrice dello splicing di tipo KH (FBP2), un fattore legante l’RNA che coordina la regolazione genica post-trascrizionale controllando lo splicing del pre‑mRNA, la stabilità dell’mRNA, la localizzazione e la traduzione. FBP2 interagisce con elementi ricchi in AU e con motivi di RNA ricchi in G e modula programmi del metabolismo dell’RNA che plasmano la differenziazione cellulare, le risposte allo stress e gli output della segnalazione infiammatoria. Attraverso i suoi ruoli nell’elaborazione e nel turnover dell’RNA, KHSRP influenza vie legate alla proliferazione e all’apoptosi, e un’attività alterata di KHSRP è stata associata a firme di espressione genica deregolate osservate in contesti di biologia tumorale, disfunzione immunitaria e patologie neurologiche. Queste proprietà rendono KHSRP un bersaglio utile per analizzare le reti di regolazione dell’RNA e il loro impatto sulle transizioni di stato cellulare.

FBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di KHSRP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

FBP2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus KHSRP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione KHSRP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di FBP2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus KHSRP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da FBP2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via FBP2 nelle cellule tumorali con espressione di KHSRP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.