FBP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-424568-LAC

Il gene murino **Fubp1** codifica la *far upstream element binding protein 1* (FBP1), un regolatore che si lega a DNA/RNA a singolo filamento e che integra il controllo della trascrizione con il metabolismo post-trascrizionale dell’RNA. FBP1 interagisce con elementi del promotore situati molto a monte per modulare la trascrizione dipendente dall’RNA polimerasi II e può influenzare la stabilità e la traduzione degli mRNA tramite il legame a acidi nucleici strutturati. Attraverso queste attività, Fubp1 contribuisce a programmi che regolano la progressione del ciclo cellulare, l’espressione genica in risposta allo stress e stati trascrizionali specifici di linea cellulare. La disregolazione delle reti regolatorie legate a FUBP1 è stata associata ad alterazioni del controllo della crescita e a fenotipi di differenziamento in contesti rilevanti per la malattia, supportando studi meccanicistici in vie oncogeniche e del neurosviluppo.

Le particelle di attivazione lentivirale FBP1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Fubp1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FBP1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Fubp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FBP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Fubp1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.