FBL7 Plasmide Double Nickase (h): sc-405043-NIC

FBXL7 (FBL7) codifica una proteina F-box che si prevede funzioni come componente di riconoscimento del substrato dei complessi E3 ubiquitina ligasi SCF (SKP1–CUL1–F-box), contribuendo a indirizzare proteine selezionate verso l’ubiquitinazione e la degradazione proteasomiale. Attraverso questo ruolo, FBXL7 è collegato ai meccanismi fondamentali di proteostasi che modulano la progressione del ciclo cellulare, le risposte allo stress e la trasduzione del segnale, controllando la stabilità dei regolatori di via. L’alterazione dei componenti del sistema ubiquitina–proteasoma e degli adattatori F-box è frequentemente associata a crescita disregolata e a soglie apoptotiche modificate, rendendo FBXL7 un gene di interesse per la biologia meccanicistica del cancro e per studi di segnalazione correlati. Dati di espressione e alterazioni genomiche di FBXL7 sono stati riportati in diversi dataset tumorali, a supporto della sua rilevanza per indagare come il controllo proteico mediato dall’ubiquitina influenzi fenotipi cellulari associati alla malattia.

FBL7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FBXL7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FBXL7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FBXL7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FBXL7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.