FAT4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405268-NIC

FAT4は、接触依存性シグナル伝達、平面細胞極性、ならびに組織構築を制御する、プロトカドヘリン様の細胞表面受容体として機能する大型の非典型的カドヘリンをコードします。FAT4はHippo経路によるYAP/TAZ活性の制御に関与し、細胞骨格の組織化、配向性細胞分裂、上皮形態形成を協調的に調節します。FAT4の機能破綻は発生パターニング異常や増殖制御の変調と関連し、FAT4の変異は複数の組織コンテキストにおいて先天性症候群や腫瘍生物学とも関連づけられています。極性および接着の調節因子として、FAT4は臓器サイズ、分化、浸潤性挙動を規定する機構の研究で広く注目されています。

FAT4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FAT4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FAT4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FAT4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FAT4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。