FAT2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402931-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAT2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FAT2 Double Nickase Plasmid (h) e il FAT2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FAT2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FAT2 Antibody (8C5): sc-59985
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAT2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402931-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FAT2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402931-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FAT2 codifica una proteina transmembrana atipica simile alle caderine, appartenente alla famiglia delle protocaderine FAT, che contribuisce all’adesione cellula-cellula e all’organizzazione dell’architettura epiteliale. Grazie ai suoi ampi domini extracellulari con ripetizioni di caderina e alla capacità di segnalazione intracellulare, FAT2 è coinvolta nella regolazione della dinamica del citoscheletro e di processi associati alla polarità planare, che influenzano forma cellulare, migrazione e morfogenesi tissutale. Alterazioni della funzione della famiglia FAT sono state associate a una compromissione della polarità e degli stati di adesione, che può influenzare i programmi di differenziamento e l’equilibrio tra proliferazione e inibizione da contatto. FAT2 è stata studiata nel contesto della biologia dei tumori e della regolazione dello sviluppo, in cui cambiamenti nella segnalazione adesiva e nelle reti di polarità sono pertinenti ai meccanismi di malattia.
FAT2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FAT2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FAT2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FAT2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FAT2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.