FAT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-410778-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAT1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FAT1 Double Nickase Plasmid (h) e il FAT1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FAT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FAT1 Antibody (1634CT464.1.9): sc-517329
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAT1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-410778-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FAT1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410778-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FAT1 codifica una caderina atipica che agisce come grande regolatore transmembrana dell’adesione cellulare e della polarità, coordinando l’organizzazione del citoscheletro, processi simili alla polarità planare delle cellule e la segnalazione dipendente dal contatto. FAT1 è stata collegata alla modulazione dell’output della via di Hippo e al crosstalk con programmi associati a Wnt/β-catenina, influenzando la migrazione cellulare, l’architettura tissutale e la meccanotrasduzione. Un’attività di FAT1 deregolata o mutazioni sono state riportate in molteplici tipi di tumore e sono anche associate a fenotipi dello sviluppo e renali, a sostegno della sua ampia rilevanza per lo studio della morfogenesi e dell’integrità epiteliale. Nelle cellule umane in coltura, la perturbazione di FAT1 è comunemente impiegata per investigare la segnalazione dipendente dall’adesione, la dinamica dell’invasione e il controllo della polarità.
FAT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FAT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FAT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FAT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FAT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.