FAS Plasmide Double Nickase (h): sc-400481-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAS Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FAS Double Nickase Plasmid (h) e il FAS Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FAS. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FAS Antibody (B-10): sc-8009
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAS Plasmide Double Nickase (h) | sc-400481-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FAS Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400481-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FAS (CD95/TNFRSF6) codifica un recettore di morte che avvia l’apoptosi estrinseca in seguito al legame con il ligando Fas, promuovendo l’assemblaggio del DISC con FADD e l’attivazione della caspasi-8. Questo asse di segnalazione si integra con l’amplificazione mitocondriale mediata da BID e interseca le vie di NF-κB e MAPK per coordinare l’omeostasi immunitaria, la tolleranza periferica e l’eliminazione dei linfociti attivati. Alterazioni della segnalazione di FAS sono associate a un difetto della morte cellulare indotta dall’attivazione e a linfoproliferazione, e una regolazione anomala di FAS è stata osservata in molteplici neoplasie e contesti infiammatori. In quanto recettore di membrana con una forte connettività di via, FAS è spesso studiato per analizzare le soglie apoptotiche, la selezione delle cellule immunitarie e i meccanismi di resistenza alla morte cellulare.
FAS Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FAS nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FAS. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FAS. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FAS interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.