FANCI Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402229-LAC

Il gene umano **FANCI** codifica un componente fondamentale della rete di riparazione del DNA dell’anemia di Fanconi (FA), che salvaguarda l’integrità del genoma durante la replicazione del DNA. FANCI forma il complesso ID2 con FANCD2 e va incontro a fosforilazione dipendente da ATR e a monoubiquitinazione mediata dal complesso core della FA, permettendo il reclutamento di nucleasi a valle e di fattori della ricombinazione omologa per risolvere i crosslink interfilamento del DNA e le forcelle di replicazione bloccate. Grazie ai suoi ruoli nella protezione della forcella replicativa, nella segnalazione del checkpoint della fase S e nel coordinamento dei processi di riparazione, la disfunzione di FANCI è associata a instabilità cromosomica e alla patobiologia dell’anemia di Fanconi e di sindromi correlate di predisposizione al cancro. Come readout negli studi meccanicistici, l’attività di FANCI può essere monitorata tramite la monoubiquitinazione di ID2, la formazione di foci di RAD51 e la sensibilità ad agenti crosslinkanti.

Le particelle di attivazione lentivirale FANCI (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di FANCI in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FANCI (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione FANCI, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FANCI. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo FANCI e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.