FANCA Plasmide Double Nickase (h): sc-403205-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FANCA Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FANCA Double Nickase Plasmid (h) e il FANCA Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FANCA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FANCA Plasmide Double Nickase (h) | sc-403205-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FANCA Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403205-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FANCA codifica un componente fondamentale della via di riparazione del DNA dell’anemia di Fanconi (FA), che salvaguarda l’integrità del genoma durante lo stress replicativo promuovendo la riparazione dei crosslink interfilamento del DNA. FANCA partecipa al complesso core della FA, che consente la monoubiquitinazione di FANCD2 e FANCI, coordinando i successivi processi nucleolitici, la ricombinazione omologa e la protezione della forcella di replicazione. L’alterazione di FANCA compromette il controllo dei checkpoint e aumenta le rotture cromosomiche e la formazione di micronuclei, soprattutto dopo esposizione a danni da agenti crosslinkanti. Varianti patogene in FANCA sono una delle principali cause di anemia di Fanconi e sono rilevanti anche per studi sulla biologia dell’insufficienza midollare e sulle vulnerabilità della risposta al danno al DNA in modelli di cancro.
FANCA Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FANCA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FANCA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FANCA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FANCA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.