FAM21C Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404093-LAC

WASHC2C (FAM21C) codifica un componente centrale del complesso WASH, che coordina la nucleazione dell’actina sulle membrane endosomiali per controllare il riciclo dagli endosomi alla membrana plasmatica e lo smistamento del carico. Attraverso interazioni con il retromer e con i macchinari che regolano Arp2/3, FAM21C contribuisce a mantenere il traffico dei recettori, il rimodellamento delle membrane e l’organizzazione del citoscheletro, processi fondamentali per la migrazione cellulare e l’output di segnalazione. L’alterazione dell’attività della via WASH è rilevante per difetti dell’omeostasi endolisosomiale e per un turnover recettoriale modificato, frequentemente implicati nel comportamento delle cellule tumorali e nella neurobiologia. Di conseguenza, FAM21C è un bersaglio utile per studiare la dinamica dell’actina endosomiale, il riciclo dei recettori di superficie e la regolazione a livello di rete del trasporto intracellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale FAM21C (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di WASHC2C in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale FAM21C (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione WASHC2C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di FAM21C. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo WASHC2C e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.