FAIM Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423872

Panoramica

Faim codifica per la Fas apoptotic inhibitory molecule (FAIM), un fattore citoprotettivo che attenua l’apoptosi innescata dai recettori di morte e modula i segnali cellulari di sopravvivenza in risposta agli stimoli della famiglia Fas/TNFR. Nelle cellule murine, FAIM è stata collegata alla regolazione dell’attivazione delle caspasi, alle risposte allo stress e a vie di sopravvivenza come NF-κB e PI3K/AKT, influenzando gli esiti durante l’attivazione immunitaria e l’omeostasi tissutale. Alterazioni dell’attività di FAIM sono state associate a una sopravvivenza linfocitaria disregolata, a una maggiore sensibilità allo stress neurodegenerativo e a fenotipi infiammatori, rendendola rilevante per lo studio del controllo dell’apoptosi e delle decisioni di destino cellulare. L’analisi funzionale di Faim supporta studi meccanicistici in immunologia, neurobiologia e nelle vie che governano la resistenza agli stimoli apoptotici estrinseci.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FAIM (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Faim in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Faim insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Faim a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FAIM.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Faim per lo studio della segnalazione di FAIM, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Faim critici per la funzione di FAIM
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Faim per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal FAIM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FAIM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Faim. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal FAIM Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FAIM (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Faim per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Faim definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.