Factor IX CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402469

概要

ヒトF9は血液凝固因子IXをコードしており、ビタミンK依存性のセリンプロテアーゼ前駆体（ザイモーゲン）として合成された後、活性化されて因子IXaとなり、血液凝固の内因系経路で機能します。因子IXaはリン脂質表面上で因子VIIIaと複合体を形成し、因子Xの活性化を触媒することでトロンビン産生とフィブリン血栓形成を促進します。F9の活性は、翻訳後修飾であるγ-カルボキシル化やカルシウム依存的な膜結合によって調節され、肝臓でのタンパク質プロセシングや細胞外プロテアーゼカスケードと関連づけられています。F9の破綻または機能欠損は遺伝性の出血表現型と関連しており、凝固ネットワークの制御やプロテアーゼ—補因子相互作用を理解するために日常的に研究されています。

Factor IX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるF9遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、F9内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、F9のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Factor IXタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Factor IXシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、F9欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Factor IXの機能に不可欠なF9エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、F9ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Factor IX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびFactor IX CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、F9遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Factor IX HDRプラスミド（h）および Factor IX HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはF9ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のF9標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。