Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Factor IX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402469
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Factor IX Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Factor IX, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Factor IX Antibody (B-3): sc-377187
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Factor IX Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402469 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene umano **F9** codifica il fattore IX della coagulazione, uno zimogeno di serin proteasi dipendente dalla vitamina K che viene attivato a fattore IXa e opera nella via intrinseca della coagulazione del sangue. In complesso con il fattore VIIIa su superfici fosfolipidiche, il fattore IXa catalizza l’attivazione del fattore X, favorendo la generazione di trombina e la formazione del coagulo di fibrina. L’attività di F9 è modulata dalla γ-carbossilazione post-traduzionale e dal legame alla membrana dipendente dal calcio, collegandola alla maturazione proteica epatica e alle cascate proteolitiche extracellulari. L’alterazione o la carenza funzionale di F9 è associata a fenotipi emorragici ereditari ed è oggetto di studio routinario per comprendere la regolazione della rete coagulativa e le interazioni tra proteasi e cofattori.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Factor IX (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene F9 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del F9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto F9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Factor IX.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di F9 per lo studio della segnalazione di Factor IX, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni F9 critici per la funzione di Factor IX
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di F9 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Factor IX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Factor IX CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus F9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Factor IX Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Factor IX (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia F9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio F9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.