Factor IX Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402469-ACT

Il gene umano **F9** codifica il **Fattore IX** della coagulazione, uno zimogeno di serin-proteasi **vitamina K–dipendente** prodotto principalmente negli epatociti e secreto nel plasma come componente chiave della **cascata coagulativa intrinseca**. Dopo l’attivazione a **Fattore IXa**, si assembla con il **Fattore VIIIa** su superfici fosfolipidiche formando il **complesso tenasico intrinseco**, catalizzando l’attivazione del **Fattore X** e propagando la generazione di trombina. L’attività di **F9** è regolata tramite **γ-carbossilazione post-traduzionale** e legame alla membrana **calcio-dipendente**, che integrano le vie biosintetiche epatiche con la segnalazione emostatica. Alterazioni genetiche o funzionali di **F9** sono fortemente associate a disturbi della coagulazione, rendendolo un locus ampiamente utilizzato per studiare la regolazione genica epatica, la maturazione di proteasi secrete e il controllo della coagulazione a livello di via.

Factor IX Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di F9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Factor IX Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus F9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione F9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Factor IX. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus F9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Factor IX nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Factor IX nelle cellule tumorali con espressione di F9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.