Factor B Plasmide Double Nickase (h): sc-402091-NIC

Il fattore del complemento B (CFB) codifica il Fattore B, uno zimogeno di serin-proteasi centrale nella via alternativa del complemento, che amplifica le risposte dell’immunità innata sulle superfici microbiche e su superfici “self” alterate. Dopo il legame con C3b, il Fattore B viene scisso dal fattore D generando il frammento Bb, formando la C3 convertasi (C3bBb) che promuove l’opsonizzazione, la produzione di anafilotossine e, a valle, la formazione del complesso di attacco alla membrana. Questo asse interagisce con la segnalazione infiammatoria, la gestione degli immunocomplessi e il crosstalk con le reti della coagulazione e delle citochine nei microambienti tissutali. Un’attività deregolata della via alternativa e la variazione genetica in CFB sono implicate in fenotipi infiammatori mediati dal complemento, inclusa la patobiologia oculare e renale, offrendo un punto d’ingresso meccanicistico per studiare l’amplificazione del complemento in sistemi cellulari umani.

Factor B Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CFB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CFB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CFB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CFB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.