Plásmido Doble Nickase (h) Factor B: sc-402091-NIC

El factor del complemento B (CFB) codifica el Factor B, un zimógeno de proteasa serina central en la vía alternativa del complemento que amplifica las respuestas inmunitarias innatas sobre superficies microbianas y sobre superficies propias alteradas. Tras la unión de C3b, el Factor B es escindido por el factor D para generar el fragmento Bb, formando la convertasa de C3 (C3bBb), que impulsa la opsonización, la producción de anafilotoxinas y la formación posterior del complejo de ataque a la membrana. Este eje se entrecruza con la señalización inflamatoria, el manejo de complejos inmunes y la comunicación con las redes de coagulación y citocinas en los microambientes tisulares. La actividad desregulada de la vía alternativa y la variación genética en CFB se han implicado en fenotipos inflamatorios mediados por el complemento, incluida la patobiología ocular y renal, lo que proporciona un punto de entrada mecanístico para estudiar la amplificación del complemento en sistemas celulares humanos.

Factor B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CFB en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CFB. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CFB. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CFB alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.