FA2H Plasmide Double Nickase (h): sc-413143-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FA2H Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il FA2H Double Nickase Plasmid (h) e il FA2H Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FA2H. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FA2H Plasmide Double Nickase (h) | sc-413143-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FA2H Plasmide Double Nickase (h2) | sc-413143-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FA2H codifica per la 2-idrossilasi degli acidi grassi, un enzima associato al reticolo endoplasmatico che genera acidi grassi 2-idrossilati incorporati negli sfingolipidi e nei galattolipidi arricchiti nella mielina, come il galattosilceramide e il sulfatide. Attraverso la regolazione dell’idrossilazione lipidica, FA2H influenza l’organizzazione dei microdomini di membrana, le interazioni assone–glia e la funzione degli oligodendrociti all’interno delle vie metaboliche degli sfingolipidi. Un’alterata attività di FA2H è collegata a difetti nel mantenimento della mielina e nell’integrità neuronale ed è stata associata a fenotipi neurodegenerativi, tra cui la leucodistrofia e la paraplegia spastica ereditaria. FA2H rappresenta quindi un bersaglio rilevante per studi meccanicistici che collegano il rimodellamento dei lipidi allo sviluppo e alla stabilità del sistema nervoso, nonché alle risposte cellulari allo stress.
FA2H Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FA2H nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FA2H. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FA2H. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FA2H interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.