F-Spondin Plasmide Double Nickase (h): sc-404101-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- F-Spondin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il F-Spondin Double Nickase Plasmid (h) e il F-Spondin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SPON1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: F-Spondin Antibody (B-3): sc-390182
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
F-Spondin Plasmide Double Nickase (h) | sc-404101-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
F-Spondin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404101-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPON1 codifica F-spondina, una glicoproteina secreta della matrice extracellulare che modula l’adesione cellula–matrice e la guida assonale durante lo sviluppo neurale e il rimodellamento dei tessuti. Attraverso i suoi domini spondina e le ripetizioni di tipo 1 della trombospondina, la F-spondina influenza la crescita dei neuriti, la connettività sinaptica e le interazioni con i proteoglicani eparan-solfato e la segnalazione associata alle integrine. SPON1 è stata studiata in vie collegate alla neuroinfiammazione, all’organizzazione della matrice extracellulare e al rimodellamento vascolare o stromale, con associazioni riportate a fenotipi neurodegenerativi e di neurosviluppo. Queste caratteristiche rendono SPON1 un bersaglio utile per esplorare come i segnali della MEC plasmino i programmi di cablaggio neuronale e di migrazione cellulare in sistemi modello umani.
F-Spondin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SPON1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SPON1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SPON1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SPON1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.