EXOSC10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404272-ACT

L’EXOSC10 umano codifica un’esoribonucleasi catalitica 3′–5′ che funge da componente centrale dell’esosoma dell’RNA, supportando la sorveglianza e il processamento dell’RNA sia nel nucleo sia nel citoplasma. EXOSC10 contribuisce alla maturazione e al turnover di diverse classi di RNA, inclusi rRNA, sn/snoRNA e trascritti instabili o aberranti, influenzando così la biogenesi dei ribosomi, il controllo di qualità dell’RNA e l’omeostasi dell’espressione genica. Attraverso queste attività, EXOSC10 si interseca con vie legate alla funzione nucleolare, al metabolismo dell’RNA e alle risposte allo stress cellulare. La disregolazione del processamento dell’RNA associato all’esosoma è stata collegata a squilibri del trascrittoma su scala genomica e a fenotipi rilevanti per la malattia, rendendo EXOSC10 un nodo utile per studi meccanicistici sul decadimento dell’RNA e sulla regolazione adiacente alla proteostasi.

EXOSC10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di EXOSC10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

EXOSC10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus EXOSC10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione EXOSC10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di EXOSC10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus EXOSC10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da EXOSC10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via EXOSC10 nelle cellule tumorali con espressione di EXOSC10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.