Exo70 Plasmide Double Nickase (m): sc-424708-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Exo70 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Exo70 Double Nickase Plasmid (m) e il Exo70 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Exoc7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Exo70 Antibody (D-6): sc-365825
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Exo70 Plasmide Double Nickase (m) | sc-424708-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Exo70 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-424708-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Exoc7 codifica Exo70, una subunità centrale del complesso esocistico octamerico, che ancora le vescicole secretorie a specifici siti della membrana plasmatica per consentire l’esocitosi polarizzata. Nelle cellule di topo, Exo70 supporta eventi di traffico di membrana necessari per la polarità epiteliale, la crescita dei neuriti, la citocinesi e la migrazione cellulare direzionale coordinando l’attracco delle vescicole con il rimodellamento del citoscheletro di actina e le vie di segnalazione delle piccole GTPasi. Il traffico dipendente dall’esocisto influenza il riciclo dei recettori e la consegna in superficie di molecole di adesione, collegando la funzione di Exo70 a vie che regolano la forma cellulare, l’invasione e la morfogenesi dei tessuti. La disregolazione dei componenti dell’esocisto è stata associata a una motilità cellulare aberrante e a difetti dello sviluppo, rendendo Exoc7 un bersaglio utile per studi meccanicistici di fenotipi guidati dal traffico.
Exo70 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Exoc7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Exoc7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Exoc7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Exoc7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.