ETAR Plasmide Double Nickase (h): sc-401000-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ETAR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ETAR Double Nickase Plasmid (h) e il ETAR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EDNRA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ETAR Antibody (D-2): sc-518060
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ETAR Plasmide Double Nickase (h) | sc-401000-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ETAR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401000-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il recettore dell’endotelina di tipo A (ETAR), codificato dal gene umano **EDNRA**, è un recettore accoppiato a proteine G che lega l’endotelina-1 per regolare la contrazione della muscolatura liscia vascolare, la proliferazione cellulare e la segnalazione dipendente dal calcio. ETAR si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, generare IP3/DAG e attivare a valle le vie MAPK e Rho/ROCK, integrando segnali che modulano il tono vasomotorio e il rimodellamento tissutale. La segnalazione mediata da EDNRA influenza il crosstalk tra endotelio e muscolatura liscia e contribuisce a programmi angiogenici e infiammatori in diversi contesti cellulari. Un’attività deregolata di ETAR è stata associata a disfunzioni vascolari cardiopolmonari, rimodellamento fibrotico e processi del microambiente tumorale, rendendo EDNRA un bersaglio utile per studi meccanicistici sulle reti di segnalazione recettoriale.
ETAR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EDNRA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EDNRA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EDNRA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EDNRA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.