Estrogen Receptor alpha Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400011-LAC

ESR1 codifica il recettore degli estrogeni alfa (ERα), un recettore nucleare attivato dal legando che funge da fattore di trascrizione per regolare programmi genici che controllano la proliferazione cellulare, la differenziazione e l’omeostasi metabolica nei tessuti umani. Dopo il legame con gli estrogeni, ERα coordina il rimodellamento della cromatina e il reclutamento della RNA polimerasi II tramite interazioni con coattivatori e corepressori, integrando segnali tra vie endocrine e reti di crosstalk come PI3K/AKT e MAPK. L’attività di ESR1 determina output trascrizionali dipendenti dal contesto, inclusi la progressione del ciclo cellulare, l’identità epiteliale e la segnalazione infiammatoria. L’espressione deregolata di ESR1 o la segnalazione mediata da ERα sono spesso studiate nei tumori ormono-responsivi e in altri disturbi mediati dagli estrogeni, nei quali circuiti trascrizionali alterati contribuiscono a fenotipi associati alla malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale Estrogen Receptor alpha (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ESR1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Estrogen Receptor alpha (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ESR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Estrogen Receptor alpha. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ESR1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.