Estrogen Receptor alpha Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-418925-ACT

Esr1 nel topo codifica il recettore degli estrogeni alfa (ERα), un recettore nucleare attivato dal ligando che agisce come fattore di trascrizione coordinando programmi genici dipendenti dagli estrogeni. Dopo il legame con l’ormone, ERα si lega agli elementi di risposta agli estrogeni e a complessi di co-regolatori per modulare l’accessibilità della cromatina e la trascrizione, interagendo inoltre con le vie di segnalazione MAPK/ERK, PI3K/AKT e con i pathway attivati da fattori di crescita. L’attività di ERα influenza la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione, il metabolismo e stati trascrizionali legati alla risposta immunitaria, rendendo Esr1 un nodo centrale della regolazione endocrina. La deregolazione della segnalazione di ERα è ampiamente utilizzata come quadro molecolare per studiare fenotipi ormono-responsivi e la riorganizzazione trascrizionale rilevante per la malattia nei sistemi mammiferi.

Estrogen Receptor alpha Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Esr1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Estrogen Receptor alpha Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Esr1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Esr1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Estrogen Receptor alpha. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Esr1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Estrogen Receptor alpha nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Estrogen Receptor alpha nelle cellule tumorali con espressione di Esr1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.