ERp72 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402689

Panoramica

PDIA4 codifica ERp72, un membro della famiglia delle isomerasi della proteina-disolfuro residente nel reticolo endoplasmatico (RE), che catalizza reazioni di scambio tiolo–disolfuro per supportare il ripiegamento ossidativo e il controllo qualità delle proteine secrete e di membrana. ERp72 opera all’interno della rete di proteostasi del RE insieme a chaperoni e ad altre PDI, contribuendo alla segnalazione della risposta alle proteine non ripiegate (UPR), alla degradazione associata al RE (ERAD) e al mantenimento dell’omeostasi redox in condizioni di stress del RE. Modellando la maturazione delle proteine client e limitando lo stress proteotossico, PDIA4 influenza vie legate alla secrezione, al processamento dell’antigene e all’adattamento cellulare alle perturbazioni del ripiegamento proteico. Una capacità di ripiegamento nel RE deregolata e uno stress cronico del RE sono implicati nella biologia del cancro, nelle malattie metaboliche e nei processi neurodegenerativi, rendendo PDIA4 un nodo utile per studi meccanicistici sulla segnalazione dello stress e sul controllo qualità del proteoma.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ERp72 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PDIA4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PDIA4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PDIA4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ERp72.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PDIA4 per lo studio della segnalazione di ERp72, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PDIA4 critici per la funzione di ERp72
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PDIA4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ERp72 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ERp72 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PDIA4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ERp72 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ERp72 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PDIA4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PDIA4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.