ERK 5 Plasmide Double Nickase (h): sc-400891-NIC

MAPK7 codifica ERK5, un’ atipica chinasi proteica attivata dai mitogeni (MAPK) attivata a valle di MEK5 in risposta a fattori di crescita e a stress cellulari. ERK5 integra la segnalazione della cascata MAPK per regolare programmi trascrizionali che controllano proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e dinamica del citoscheletro, con ruoli di rilievo nella funzione endoteliale e nella segnalazione indotta dallo stress da shear (forze di taglio). Attraverso la fosforilazione di substrati e la regolazione di fattori di trascrizione come i membri della famiglia MEF2, ERK5 influenza la segnalazione infiammatoria e l’adattamento cellulare ai segnali del microambiente. Un’attività deregolata di MAPK7/ERK5 è stata associata ad alterazioni delle reti di segnalazione oncogeniche e a fenotipi vascolari e infiammatori, rendendolo un nodo utile per studi di via di segnalazione e di meccanismo in cellule umane.

ERK 5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAPK7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAPK7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAPK7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAPK7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.