Erg Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-420226-LAC

Erg codifica un fattore di trascrizione della famiglia ETS che si lega a motivi GGAA/T per coordinare programmi genici che controllano la biologia endoteliale, il mantenimento delle cellule staminali e progenitrici ematopoietiche e la differenziazione specifica di linea. Nel topo, Erg integra segnali provenienti da vie di sviluppo e vascolari per regolare la progressione del ciclo cellulare, la sopravvivenza e lo stato della cromatina tramite il controllo trascrizionale di bersagli associati ad angiogenesi, infiammazione e “stemness”. Un’attività di ERG deregolata è collegata ad alterazioni dell’ematopoiesi e a un rimodellamento vascolare aberrante, ed è ampiamente studiata nel contesto della riscrittura delle reti trascrizionali nella leucemogenesi e nella disfunzione endoteliale. Queste funzioni rendono Erg un nodo utile per esplorare i circuiti di regolazione genica, l’utilizzo degli enhancer e le decisioni di destino cellulare in modelli murini rilevanti e in sistemi di cellule primarie.

Le particelle di attivazione lentivirale Erg (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Erg in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Erg (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Erg, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Erg. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Erg e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.