Erg-1/2/3 Plasmide Double Nickase (h): sc-400404-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Erg-1/2/3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Erg-1/2/3 Double Nickase Plasmid (h) e il Erg-1/2/3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ERG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Erg-1/2/3 Antibody (D-3): sc-271048
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Erg-1/2/3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400404-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Erg-1/2/3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400404-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ERG codifica il fattore di trascrizione della famiglia ETS Erg-1/2/3, un regolatore nucleare di programmi genici che controllano l’omeostasi endoteliale, la differenziazione ematopoietica e la migrazione cellulare. ERG integra segnali provenienti dalle vie associate a MAPK/ERK e PI3K/AKT per modulare reti trascrizionali coinvolte nello sviluppo vascolare, nelle risposte infiammatorie e nella specificazione di linea. Un’attività di ERG deregolata è associata a un rimodellamento trascrizionale oncogenico, inclusi fusioni geniche ETS ed espressione aberrante nelle leucemie e nel carcinoma della prostata, rendendolo un nodo chiave per lo studio dei meccanismi di malattia guidati dai fattori di trascrizione. L’analisi sperimentale di ERG supporta la ricerca sulla regolazione genica dipendente dalla cromatina, sull’utilizzo degli enhancer e sul controllo, specifico del contesto, di proliferazione e differenziamento.
Erg-1/2/3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ERG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ERG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ERG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ERG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.