ErbB3/HER3 Plasmide Double Nickase (m): sc-420219-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ErbB3/HER3 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ErbB3/HER3 Double Nickase Plasmid (m) e il ErbB3/HER3 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Erbb3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ErbB3/HER3 Antibody (G-4): sc-7390
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ErbB3/HER3 Plasmide Double Nickase (m) | sc-420219-NIC | 20 µg | $410.00 |
Erbb3 codifica il recettore tirosin-chinasico ErbB3/HER3, un membro della famiglia EGFR/ErbB che agisce principalmente tramite eterodimerizzazione con chinasi come ERBB2 per avviare la segnalazione a valle. Nonostante una limitata attività chinasica intrinseca, ErbB3 presenta molteplici motivi di legame per PI3K ed è un nodo chiave nella regolazione delle vie PI3K–AKT e MAPK, influenzando proliferazione, sopravvivenza, differenziamento e sviluppo epiteliale nei tessuti murini. Il legame del ligando (ad es. le neureguline) e il crosstalk tra recettori modellano le risposte cellulari, rendendo Erbb3 un frequente punto di attenzione meccanicistico negli studi sull’integrazione della segnalazione recettoriale. La deregolazione della segnalazione di ErbB3/HER3 è spesso analizzata nel rimodellamento delle vie oncogeniche, nella segnalazione adattativa alla terapia e in fenotipi dello sviluppo rilevanti per modelli di malattia.
ErbB3/HER3 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Erbb3 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Erbb3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Erbb3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Erbb3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.