Epiregulin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420224

Panoramica

Il gene murino **Ereg** codifica l’epiregulina, un membro secreto della famiglia EGF che interagisce con i recettori EGFR/ERBB per modulare la segnalazione paracrina e autocrina. L’epiregulina regola proliferazione, sopravvivenza e migrazione di cellule epiteliali e stromali, integrandosi con l’attività delle vie MAPK/ERK e PI3K/AKT e contribuendo ai programmi di riparazione delle ferite e rimodellamento tissutale. L’espressione di **Ereg** risponde a segnali infiammatori e di danno ed è spesso studiata in contesti in cui la segnalazione della rete EGFR si interseca con microambienti guidati da citochine. Una segnalazione dell’epiregulina deregolata è stata collegata ad alterazioni della funzione di barriera, rimodellamento fibrotico e circuiti di segnalazione oncogenici, sostenendone l’uso come nodo meccanicistico negli studi sulle interazioni tumore–stroma e sulla segnalazione dei fattori di crescita associata all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Epiregulin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ereg in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ereg insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ereg a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Epiregulin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ereg per lo studio della segnalazione di Epiregulin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ereg critici per la funzione di Epiregulin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ereg per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Epiregulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Epiregulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ereg. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Epiregulin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Epiregulin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ereg per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ereg definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.