ephrin-A5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402127-ACT

EFNA5 codifica a efirina-A5, um ligante ancorado por glicosilfosfatidilinositol (GPI) para as tirosina-quinases receptoras EphA, que medeia sinalização dependente de contato na superfície celular. As interações efirina-A5–EphA coordenam a orientação axonal, a formação de sinapses e o estabelecimento de limites teciduais ao regular a dinâmica do citoesqueleto, a adesão celular e sinais repulsivos/atrativos de migração por meio de vias como as GTPases da família Rho, MAPK/ERK e PI3K. Em contextos não neuronais, EFNA5 contribui para comportamentos epitélio–mesênquima, para o padrão de vascularização e para a modulação do microambiente tumoral via sinalização bidirecional Eph/efirina. A atividade desregulada da via Eph/efirina, incluindo alterações na expressão de EFNA5, tem sido associada à motilidade e invasividade celulares aberrantes em modelos de câncer e a fenótipos do neurodesenvolvimento relevantes para a montagem de circuitos neurais.

ephrin-A5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EFNA5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ephrin-A5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EFNA5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EFNA5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ephrin-A5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EFNA5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ephrin-A5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ephrin-A5 em células tumorais com expressão de EFNA5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.