ephrin-A3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402771-ACT

EFNA3 codifica a efirina-A3, um ligante ancorado por glicosilfosfatidilinositol (GPI) para as tirosina-quinases receptoras EphA, que medeia a comunicação célula–célula dependente de contato. A sinalização efirina-A3/EphA regula a remodelação do citoesqueleto, a adesão celular e a migração direcional, influenciando a formação de fronteiras teciduais, o direcionamento axonal e o padrão de vascularização por meio de vias que incluem GTPases da família Rho e programas dependentes de MAPK. Em sistemas de mamíferos, alterações na sinalização efirina–Eph têm sido associadas a mudanças na conectividade neuronal, na remodelação angiogênica e em fenótipos invasivos em múltiplos contextos de doença, tornando o EFNA3 um nó útil para estudar a sinalização do microambiente. Assim, a atividade de EFNA3 humana é relevante para dissecar como sinais ancorados à membrana moldam a diferenciação, a motilidade e a organização tecidual.

ephrin-A3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EFNA3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ephrin-A3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EFNA3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EFNA3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ephrin-A3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EFNA3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ephrin-A3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ephrin-A3 em células tumorais com expressão de EFNA3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.