ephrin-A2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403672-LAC

EFNA2 codifica per l’efrina-A2, un ligando di membrana ancorato tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI) per le tirosin-chinasi recettoriali EphA, che media una segnalazione dipendente dal contatto tra cellule adiacenti. Le interazioni efina-A2–EphA regolano la guida assonale, la mappatura topografica e la formazione di confini, e coordinano anche adesione, repulsione e migrazione cellulari attraverso le GTPasi della famiglia Rho e vie di rimodellamento del citoscheletro. In contesti non neuronali, l’efrina-A2 contribuisce al patterning angiogenico e all’organizzazione dei tessuti modulando l’aggregazione dei recettori, l’endocitosi e gli output di segnalazione a valle associati a MAPK/ERK e PI3K. Reti di segnalazione Eph/efrina deregolate, incluse quelle dipendenti da EFNA2, sono spesso studiate in modelli di motilità cellulare anomala, comportamento invasivo e interazioni alterate con il microambiente in oncologia e biologia vascolare.

Le particelle di attivazione lentivirale ephrin-A2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di EFNA2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ephrin-A2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione EFNA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ephrin-A2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo EFNA2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.