ephrin-A2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403672-ACT

EFNA2 は、Eph 受容体型チロシンキナーゼのリガンドであるエフリンA2をコードしており、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカーによって細胞膜に結合しています。エフリンA2は細胞—細胞間コミュニケーションにおける接触依存的シグナル伝達を担います。Eph／エフリンシグナルは、RhoファミリーGTPase、MAPKシグナル、細胞骨格リモデリングと連携する経路を介して、軸索ガイダンス、神経回路の構築、血管パターニング、上皮境界の形成、細胞移動を制御します。EFNA2 の発現変化や EphA–エフリンA シグナルのバランス異常は、神経発生過程やがん生物学に関連する、接着および運動性の異常表現型と関連づけられており、腫瘍浸潤や血管新生に伴うリモデリングなどにも関与します。さらに、細胞表面に係留されたキューとしてのエフリンA2は、リガンド発現細胞と受容体発現細胞がそれぞれ異なる下流応答を引き起こす「双方向シグナル伝達」の研究にも有用です。

ephrin-A2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EFNA2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ephrin-A2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EFNA2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEFNA2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ephrin-A2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEFNA2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるephrin-A2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEFNA2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるephrin-A2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。