EphA7 Plasmide Double Nickase (h): sc-401722-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EphA7 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EphA7 Double Nickase Plasmid (h) e il EphA7 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EPHA7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EphA7 Antibody (E-7): sc-393973
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EphA7 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401722-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphA7 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401722-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHA7 codifica EphA7, un recettore tirosin-chinasico della famiglia delle ephrine (Eph) che media la comunicazione cellula-cellula legandosi ai ligandi ephrin-A ancorati alla membrana. La segnalazione di EphA7 coordina la guida assonale, la patternizzazione neuronale e corticale e la formazione dei confini tissutali regolando il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione e la migrazione direzionale. Gli effetti a valle intersecano la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho e cascate chinasiche che influenzano i programmi di proliferazione e differenziamento. Un’attività deregolata di EPHA7 e un’alterazione dell’equilibrio della via ephrin/Eph sono state riportate in molteplici contesti patologici, inclusi disturbi del neurosviluppo e cambiamenti associati al cancro nell’invasione e nello smistamento cellulare.
EphA7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EPHA7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EPHA7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EPHA7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EPHA7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.