EphA1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403340-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- EphA1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il EphA1 Double Nickase Plasmid (h) e il EphA1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira EPHA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: EphA1 Antibody (5D2A4): sc-65993
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
EphA1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403340-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphA1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403340-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHA1 codifica per EphA1, una tirosin-chinasi recettoriale della rete di segnalazione delle efrine che media la comunicazione cellulare dipendente dal contatto. EphA1 regola la dinamica del citoscheletro, l’adesione cellulare e la migrazione direzionale attraverso vie a valle che includono le GTPasi della famiglia Rho, la segnalazione MAPK/ERK e gli output di segnalazione associati a PI3K. In contesti epiteliali ed endoteliali, EphA1 contribuisce alla formazione dei confini tissutali e all’organizzazione delle giunzioni cellula–cellula, collegando un’alterata attività recettoriale a cambiamenti dell’invasività e delle interazioni con il microambiente. Un’espressione o una segnalazione deregolata di EPHA1 è stata riportata in molteplici tipi di tumore ed è studiata anche in relazione alla neurobiologia e ai processi di rimodellamento associati all’infiammazione.
EphA1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EPHA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EPHA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EPHA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EPHA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.