Epac Plasmide Double Nickase (h): sc-401807-NIC

Il RAPGEF3 umano codifica Epac (exchange protein directly activated by cAMP), un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina che attiva preferenzialmente Rap1 e Rap2 per collegare i segnali del cAMP a risposte dipendenti da piccole GTPasi. Epac regola l’adesione mediata dalle integrine, la funzione di barriera endoteliale, il traffico vescicolare e il rimodellamento delle giunzioni cellulari, integrando gli input della segnalazione dei GPCR nella dinamica del citoscheletro e delle membrane. Attraverso il controllo, guidato da Rap, di nodi di segnalazione correlati a MAPK e PI3K, RAPGEF3 influenza proliferazione, migrazione e secrezione in molteplici tipi cellulari. Una segnalazione cAMP–Epac–Rap deregolata è stata implicata in fenotipi cardiovascolari e metabolici ed è studiata in contesti che includono infiammazione, fibrosi e alterazioni associate al cancro dell’adesione e dell’invasività.

Epac Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAPGEF3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAPGEF3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAPGEF3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAPGEF3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.