ENOPH1 Plasmide Double Nickase (m): sc-426793-NIC

Enoph1 codifica l’enzima murino ENOPH1, una proteina metabolica coinvolta in processi intracellulari di ossidoriduzione e dipendenti dai tioli, collegando lo stato energetico cellulare ai percorsi di detossificazione e di adattamento allo stress. L’attività di ENOPH1 viene comunemente discussa nel contesto del metabolismo associato al glutatione e dei relativi intermedi, con effetti a valle sulla gestione dello stress ossidativo, sulla funzione mitocondriale e sull’omeostasi metabolica complessiva. L’alterazione di questi processi può influenzare i programmi di proliferazione e sopravvivenza nei tessuti metabolicamente attivi ed è rilevante per la ricerca sulla disfunzione metabolica e sui fenotipi associati allo stress. Di conseguenza, Enoph1 rappresenta un bersaglio utile per analizzare come il tamponamento redox e il metabolismo di piccole molecole plasmino la fisiologia cellulare in modelli murini.

ENOPH1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Enoph1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Enoph1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Enoph1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Enoph1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.