Plásmido Doble Nickase (h) Endothelin-3/EDN3/ET-3: sc-404436-NIC

EDN3 codifica la endotelina-3 (ET-3), un ligando peptídico vasoactivo secretado para los receptores de endotelina, con una señalización destacada a través de EDNRB para regular la migración, proliferación y diferenciación de las células de la cresta neural. ET-3 activa vías mediadas por GPCR, incluida la señalización PLCβ–IP3/Ca²⁺, la activación de PKC y programas descendentes MAPK/ERK que influyen en el desarrollo de melanocitos y neuronas entéricas. En biología del desarrollo, la actividad del eje EDN3–EDNRB es fundamental para la formación del sistema nervioso entérico y la pigmentación, vinculando la señalización alterada con neurocristopatías congénitas. La desregulación de la señalización de endotelina también proporciona un marco mecanístico para estudiar decisiones de destino celular, el patrón tisular y la comunicación con el microambiente en contextos relevantes para la enfermedad.

Endothelin-3/EDN3/ET-3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EDN3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EDN3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EDN3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EDN3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.