Endothelin-3/EDN3/ET-3 Plasmide Double Nickase (h): sc-404436-NIC

EDN3 codifica l’endotelina-3 (ET-3), un ligando peptidico vasoattivo secreto dei recettori dell’endotelina, con una segnalazione marcata attraverso EDNRB che regola la migrazione, la proliferazione e la differenziazione delle cellule della cresta neurale. ET-3 attiva vie mediate da GPCR, tra cui la segnalazione PLCβ–IP3/Ca²⁺, l’attivazione di PKC e i programmi a valle MAPK/ERK che influenzano lo sviluppo dei melanociti e dei neuroni enterici. In biologia dello sviluppo, l’attività dell’asse EDN3–EDNRB è centrale per la formazione del sistema nervoso enterico e per la pigmentazione, collegando alterazioni della segnalazione a neurocristopatie congenite. Una segnalazione dell’endotelina deregolata fornisce inoltre un quadro meccanicistico per studiare decisioni sul destino cellulare, patterning tissutale e comunicazione con il microambiente in contesti rilevanti per la malattia.

Endothelin-3/EDN3/ET-3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EDN3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EDN3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EDN3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EDN3 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.