Endothelin-2/EDN2/ET-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-403871-NIC

EDN2 codifica l’endotelina-2 (ET-2), un peptide vasoattivo secreto della famiglia delle endoteline che segnala principalmente attraverso i recettori dell’endotelina ETA (EDNRA) ed ETB (EDNRB), regolando la contrazione della muscolatura liscia, il tono vascolare e la comunicazione paracrina. ET-2 attiva vie di segnalazione mediate da recettori accoppiati a proteine G (GPCR) che modulano i flussi intracellulari di calcio, le cascate PKC/MAPK e i programmi trascrizionali a valle, con effetti su proliferazione, migrazione e rimodellamento della matrice extracellulare. L’espressione di EDN2 è strettamente regolata nei tessuti riproduttivi e in condizioni di ipossia e infiammazione, collegandola a processi quali la rottura follicolare associata all’ovulazione, le risposte angiogeniche e il reclutamento di cellule immunitarie. Un’alterazione della segnalazione delle endoteline è stata implicata nel rimodellamento cardiovascolare, in fenotipi fibrotici e in cambiamenti del microambiente associato ai tumori, rendendo EDN2 un nodo utile per studi meccanicistici delle vie guidate dai GPCR.

Endothelin-2/EDN2/ET-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EDN2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EDN2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EDN2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EDN2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.