Endothelin-2/EDN2/ET-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403871-ACT

EDN2 codifica a endotelina-2 (ET-2), um potente peptídeo vasoativo processado a partir de um pré-pró-peptídeo e que atua principalmente por meio dos receptores de endotelina (EDNRA/EDNRB) para regular a contração do músculo liso, a sinalização endotelial e o controle parácrino da perfusão tecidual. A sinalização de ET-2 envolve vias acopladas à proteína G que modulam o cálcio intracelular e as cascatas MAPK/ERK e PLC/PKC, influenciando proliferação, migração e a produção de mediadores inflamatórios. Além da biologia vascular, o EDN2 está implicado na dinâmica reprodutiva e dos folículos ovarianos, em programas transcricionais responsivos à hipóxia e na remodelação do estroma. A atividade desregulada do eixo das endotelinas, incluindo alterações na expressão de EDN2, tem sido associada a processos fibróticos, à fisiopatologia pulmonar e cardiovascular e à sinalização do microambiente tumoral relevante para a biologia do câncer.

Endothelin-2/EDN2/ET-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de EDN2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Endothelin-2/EDN2/ET-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus EDN2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição EDN2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Endothelin-2/EDN2/ET-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus EDN2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Endothelin-2/EDN2/ET-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Endothelin-2/EDN2/ET-2 em células tumorais com expressão de EDN2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.