Enamelin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403738-ACT

ENAMは、歯の発生過程でエナメル芽細胞により高発現し、発達中のエナメル質マトリックスに取り込まれる、分泌型の細胞外マトリックス糖タンパク質であるエナメルインをコードします。エナメルインは、ハイドロキシアパタイト結晶の核形成と成長を調節し、マトリックス成熟の過程で他のエナメル質マトリックスタンパク質やエナメル質プロテアーゼと協調することで、エナメル質の生体鉱物化に関与します。これらの過程は、エナメル質の厚さ、硬さ、プリズム構造を制御する細胞外マトリックスの組織化およびミネラル代謝経路と交差しています。ENAMの遺伝学的攪乱は、エナメル質形成不全（アメロジェネシス・インパーフェクタ）を含む遺伝性のエナメル質形成異常と強く関連しており、ENAMは、鉱質化組織生物学における遺伝子型—表現型の関係を研究するための有用なモデルとなります。

Enamelin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ENAMの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Enamelin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ENAM 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はENAM転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Enamelinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のENAM遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEnamelin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびENAM発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEnamelin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。