EN1/Engrailed 1 Plasmide Double Nickase (h): sc-405900-NIC

EN1 (Engrailed 1) codifica un fattore di trascrizione homeobox che regola la definizione dei pattern embrionali e lo sviluppo neurale controllando programmi di espressione genica coinvolti nella specificazione del destino cellulare, nella differenziazione e nella guida assonale. Nelle cellule umane, EN1 contribuisce a reti trascrizionali che intersecano vie di segnalazione dello sviluppo come Wnt/β-catenina e SHH, influenzando l’identità regionale e la morfogenesi tissutale. Un’espressione deregolata di EN1 o un suo controllo epigenetico alterato sono stati associati a programmi di linea cellulare modificati e a fenotipi legati ai tumori in diversi contesti, rendendolo un nodo utile per studiare la riattivazione di programmi di sviluppo e le transizioni di stato cellulare. Per questo EN1 è frequentemente indagato in modelli di neurosviluppo, mantenimento neuronale e rimodellamento trascrizionale rilevante per la malattia.

EN1/Engrailed 1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus EN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di EN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di EN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con EN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.